ПРОДОЛЖЕНИЕ.
3.10.3. Проведение испытания
В стакан вместимостью 50 см вносят испытуемого продукта 0,3 г, добавляют 10 см дистиллированной воды, перемешивают. Содержимое стакана переносят в делительную воронку, добавляют эфир (3 раза по 20 см ), осторожно перемешивают, не допуская образования эмульсии. Эфирные извлечения отделяют, соединяют, сливая из делительной воронки в чистую сухую колбу, затем их переносят в делительную воронку и добавляют раствор натрия гидроксида концентрации 1 моль/дм 3 раза по 6 см . Эфирный раствор отбрасывают. Водно-щелочное извлечение собирают в чистую сухую колбу, добавляют раствор серной кислоты с массовой долей 50% до рН около 1 по тимоловому синему, вносят натрий углекислый кислый (бикарбонат натрия) до рН раствора около 8 по тимоловому синему. Раствор переносят в делительную воронку, приливают эфир (3 раза по 10 см ), осторожно перемешивают, не допуская образования эмульсии. Эфирные извлечения отбрасывают.
Водныйэкстракт переносят в коническую колбу, подкисляют раствором серной кислоты с массовой долей 50% до рН около 1, переносят в делительную воронку, добавляют эфир (3 раза по 10 см ). Эфирные извлечения объединяют и в делительной воронке промывают водой до нейтральной реакции промывных вод.
Эфирные извлечения из делительной воронки фильтруют в коническую колбу через безводный сернокислый натрий (сульфат натрия). Делительную воронку ополаскивают 3 см эфира и присоединяют его через тот же сульфат натрия к основному эфирному извлечению.
Эфирные извлечения переносят в чистую, сухую колбу, подсоединяют ее к перегонному аппарату. Эфир отгоняют на водяной бане при температуре не выше 50 °С.
К сухому остатку приливают 6 см раствора гидроксида натрия концентрации 0,01 моль/дм и остаток растворяют при слабом подогревании на теплой водяной бане. К раствору добавляют каплю фенолфталеина и титруют раствором серной кислоты концентрации 0,01 моль/дм до исчезновения розовой окраски.
3.10.4. Обработка результатов
Массовую долю деценовых кислот ( ) в процентах вычисляют по формуле
,
где - объем раствора гидроксида натрия, см ;
- титр раствора гидроксида натрия, см ;
- объем раствора серной кислоты, см ;
- навеска испытуемого продукта, г;
- массовая доля влаги маточного молочка, %.
на окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 0,7%.
3.11. Определение массовой доли сырого протеина
3.11.1. Аппаратура, материалы, реактивы
Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г поГОСТ 24104.
Горелка газовая, электроплитка или колбонагреватель по ГОСТ 14919.
Колбы конические Кн-1-100-14/23 ТС, Кн-1-250-14/23, Кн-1-1000-29/32 и Кн-1-2500-29/32 поГОСТ 25336.
Колбы Кьельдаля 2-250-29 ТХС или 2-500-29 ТХС по ГОСТ 25336.
Аппарат для отгонки летучих соединений (аммиака).
Стаканы Н-1-200 ТХС по ГОСТ 25336.
Пробирки П 2-16-180 или П 2-19-180 по ГОСТ 25336.
Насос водоустройный лабораторный.
Воронки по ГОСТ 23932.
Воронка Бюхнера по ГОСТ 9147.
Пипетки по нормативно-технической документации.
Колба Бунзена для фильтрования под вакуумом по ГОСТ 23932.
Ареометр.
Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч. или ч.д.а., плотностью 1,84 г/см .
Кислота борная по ГОСТ 9656, х.ч. или ч.д.а.
Натрия гидроксид по ГОСТ 4328, ч.д.а., раствор концентрации 0,1 моль/дм и раствор с массовой долей 40%.
Бумага лакмусовая.
Метиленовый голубой.
Метиловый красный.
Фенолфталеин.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Пергидроль по ГОСТ 177.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Вода дистиллированная.
3.11.2. Подготовка к испытанию
3.11.2.1. Приготовление раствора натрия гидроксида с массовой долей 40%
В химический стакан вместимостью 200 см наливают около 30 см дистиллированной воды, вносят 60 г кристаллического гидроксида натрия, перемешивают стеклянной палочкой и после охлаждения до температуры окружающего воздуха раствор через стеклянную воронку переносят в мерную колбу вместимостью 100 см , дистиллированной водой доводят объем до метки.
Для очистки натрия гидроксида от углекислых солей в раствор вносят около 100 мг кристаллического хлористого бария, перемешивают и через 5-7 сут прозрачный раствор гидроксида натрия сифоном осторожно сливают с осадка в чистую сухую склянку. Плотность раствора определяют ареометром.
3.11.2.2. Приготовление раствора фенолфталеина с массовой долей 0,1%
В мерную колбу вместимостью 100 см наливают 70 см этилового ректификованного спирта, вносят 0,1 г фенолфталеина, перемешивают и дистиллированной водой доводят объем до метки. Раствор фенолфталеина через бумажный фильтр фильтруют в чистую сухую склянку.
3.11.2.3. Приготовление индикатора N 1 раствора метилового красного с массовой долей 0,4%
В мерную колбу вместимостью 100 см наливают около 70 см этилового спирта, вносят 0,4 г метилового красного, перемешивают и этиловым спиртом объем доводят до метки.
3.11.2.4. Приготовление индикатора N 2 раствора метиленового голубого (метиленовая синь) с массовой долей 0,2%
В мерную колбу вместимостью 100 см наливают около 70 см этилового спирта, вносят 0,2 г метиленового голубого, перемешивают и этиловым спиртом объем доводят до метки.
3.11.2.5. Приготовление раствора борной кислоты с массовой долей 2%
В мерную колбу вместимостью 1000 см наливают около 700 см дистиллированной воды, вносят 20 г борной кислоты, перемешивают и дистиллированной водой доводят объем до метки.
3.11.2.6. Приготовление рабочего раствора борной кислоты с массовой долей 2%
К 1000 см раствора борной кислоты с массовой долей 2% приливают 10 см индикатора Гроака, состоящего из равных объемов индикаторов N 1 и 2, т.е. 5 см индикатора N 1 и 5 см индикатора N 2. Раствор борной кислоты хранят с индикатором Гроака в склянке темного стекла с пробкой.
3.11.2.7. Приготовление раствора серной кислоты концентрации 0,01 моль/дм по пп.3.10.2.3 и 3.10.2.4.
3.11.3. Проведение испытания
В сухую колбу Кьельдаля отвешивают 0,05 г продукта (результат взвешивания записывают с точностью до четвертого десятичного знака), приливают 5 см концентрированной серной кислоты плотностью 1,84 г/см , перемешивают и на песочной бане нагревают в вытяжном шкафу в течение 1 ч, охлаждают, приливают 2-3 см перекиси водорода и продолжают нагревать (отжигая) до полного обесцвечивания содержимого колбы Кьельдаля. На стенках колбы не должно оставаться черных несгоревших частиц испытуемого материала. Сжигание заканчивают, когда содержимое колбы приобретает зеленовато-голубоватый цвет без желтого оттенка.
Колбы охлаждают и их содержимое без потерь порциями, заполаскивая дистиллированной водой, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см , перемешивают, охлаждают и дистиллированной водой доводят объем до метки. Приступают к отгонке аммиака испытуемого раствора и его улавливанию раствором борной кислоты.
В коническую колбу вместимостью 150 см (приемник) из бюретки наливают 10 см рабочего раствора борной кислоты с массовой долей 2%. В приемную колбу с борной кислотой погружают конец трубки холодильника аппарата для отгонки летучих соединений (аммиака). В колбу для отгонки (в этом аппарате) через воронку наливают 10 см испытуемого раствора (из мерной колбы), добавляют 2 капли фенолфталеина и 1-5 см раствора гидроксида натрия с массовой долей 40%, промывая воронку 10-15 см дистиллированной воды, и перемешивают легким покачиванием отгонной колбы. Появление пузырьков воздуха в приемнике свидетельствует о герметичности системы, что является необходимым условием при получении объективных результатов. В отгонную колбу впускают из парообразователя перегретый пар, который, проходя через раствор, в отгонной колбе увлекает аммиак. Раствор аммиака улавливает раствор борной кислоты с массовой долей 2% в приемной колбе. Отгонку аммиака продолжают 15-20 мин. Капля дистиллята на трубке холодильника не должна окрашивать лакмусовую бумагу. Затем конец трубки холодильника промывают дистиллированной водой над приемной колбой.
Содержимое приемной колбы титруют раствором серной кислоты концентрации 0,01 моль/дм до изменения окраски раствора от зеленого до красно-фиолетового.
Аппарат для отгонки дважды промывают дистиллированной водой и заливают новую порцию испытуемого раствора.
3.11.4. Обработка результатов
Массовую долю сырого протеина ( ) в процентах вычисляют по формуле
,
где - объем раствора серной кислоты концентрации 0,01 моль/дм , израсходованный на титрование, см ;
- поправочный коэффициент к титру раствора серной кислоты концентрации 0,01 моль/дм ;
- масса навески маточного молочка, г;
- массовая доля влаги в маточном молочке, %;
- общий объем раствора, в котором растворена навеска, см ;
- количество испытуемого раствора, см ;
- пересчет на абсолютно сухое вещество;
- постоянные коэффициенты.
За окончательный результат испытаний принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 0,5%.
3.12. Определение массовой доли восстанавливающих сахаров и сахарозы
3.12.1. Аппаратура, материалы, реактивы - по ГОСТ 19792.
3.12.2. Подготовка к испытанию - по ГОСТ 19792.
3.12.3. Проведение испытания
3.12.3.1. Колориметрирование стандартного раствора и построение калибровочного графика - по ГОСТ 19792.
3.12.3.2 Определение массовой доли восстанавливающих сахаров до инверсии
В мерную колбу вместимостью 100 см отвешивают 3 г маточного молочка (результат взвешивания записывают с точностью до второго десятичного знака), растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды и дистиллированной водой доводят содержимое до метки. Затем 50 см этого раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и объем доводят дистиллированной водой до метки (получают рабочий раствор испытуемого продукта).
В коническую колбу вместимостью 250 см вносят 20 см раствора феррицианида, 5 см раствора гидроксида натрия или калия концентрации 2,5 моль/дм и 10 см рабочего раствора испытуемого маточного молочка, нагревают до кипения и кипятят 1 мин, быстро охлаждают и определяют оптическую плотность на фотоколориметре.
3.12.3.3. Определение массовой доли общих сахаров после инверсии
В оставшийся раствор, приготовленный по п.3.12.3.2, добавляют 5 см концентрированной соляной кислоты, помещают в колбу термометр и ставят в нагретую до 80-82 °С водяную баню. Содержимое колбы нагревают до 67-70 °С и выдерживают колбу при этой температуре точно 5 мин. Затем колбу с содержимым немедленно охлаждают до 20 °С, добавляют одну каплю раствора метилового оранжевого, нейтрализуют раствором гидроксида натрия с массовой долей 25%, доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают.
Содержимое общих сахаров после инверсии определяют так же как и восстанавливающих сахаров до инверсии.
3.12.4. Обработка результатов
3.12.4.1. Массовую долю восстанавливающих сахаров до инверсии ( ) в процентах вычисляют по формуле
,
где - количество восстанавливающих сахаров, найденное по градуировочному графику, см ;
- объем мерной колбы, в которой растворена навеска, см ;
- объем мерной колбы с рабочим раствором, см ;
- объем раствора маточного молочка, израсходованный для реакции с феррицианидом, см ;
- масса навески, г;
- объем раствора маточного молочка, израсходованный для приготовления рабочего раствора, см ;
- мг сахарозы в 1 см раствора;
- постоянный коэффициент, равный 0,95;
- пересчет на абсолютно сухое вещество;
- постоянные коэффициенты.
3.12.4.2. Массовую долю общих сахаров после инверсии ( ) в процентах вычисляют по формуле
,
где - количество общих сахаров, найденное по градуировочному графику, см .
3.12.4.3. Массовую долю сахарозы ( ) в процентах вычисляют по формуле
3.13. Определение антимикробной активности и бактериальной обсемененности непатогенными микроорганизмами
3.13.1. Аппаратура, материалы
Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г поГОСТ 24104.
Термостат.
Автоклав - паровой стерилизатор.
Чашки Петри.
Питательный агар, желточно-солевой агар, кровяной агар, среда Сабуро.
Вода дистиллированная.
3.13.2. Подготовка к испытанию
Навеску маточного молочка, в пересчете на сухой остаток, массой 5,0; 7,0; 10,5; 14,0; 17,5 мг на 1 см среды вносят в расплавленный и остуженный до 43-45° агар, тщательно перемешивают. Питательную среду с маточным молочком разливают в стерильные чашки Петри. После застывания агара делают посев стандартного штамма золотистого стафилококка (штамм 209 Р), внося 0,1 см одномиллиардной взвеси суточной бульонной культуры и распределяя ее стерильным шпателем по поверхности среды.
Чашки Петри с маточным молочком в агаре и культурой ставят в термостат и выдерживают при 37 °С в течение 18-24 ч.
Учитывают минимальную подавляющую концентрацию (МПК) маточного молочка, которая останавливает рост стафилококка.
3.13.3. Проведение испытания
Навеску маточного молочка в пересчете на абсолютно сухое вещество массой 200 мг засевают в объеме 0,1 см на чашки с питательным агаром, кровяным агаром, желточно-солевым агаром, средой Сабуро, в пробирку со средой Китта-Тароцци. Эти среды используют для выявления соответственно: общей бактериальной обсемененности, синегнойной палочки, стрептококка, стафилококка бактерий кишечного семейства, дрожжеподобных грибов рода Кандида, патогенных анаэробов. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 2 сут, а для грибов Кандида - при температуре 28-30 °С - в течение 6 сут.
Не допускается присутствие: стафилококков, стрептококков, синегнойной палочки, грибов рода Кандида, а также патогенных анаэробов.
Для контроля в тех же условиях выдерживают незасеянные питательные среды, которые при учете должны оставаться стерильными.
3.13.4. Обработка результатов
Общее количество бактерий в 1 г продукта подсчитывают через 48 ч, грибов Кандида - 6 сут.
3.14. Определение биологической активности
3.14.1. Аппаратура
Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г поГОСТ 24104.
Мисочки.
Шаблон.
Чашки Петри.
Термостат.
Термометр ртутный лабораторный.
Шпатель.
Пчелиная семья.
3.14.2. Подготовка к испытанию
Из расплавленного воска изготавливают с помощью шаблона мисочки диаметром 8 мм и глубиной 10 мм. Для этого шаблон трижды погружают в расплавленный воск, сначала на глубину 10 мм, затем - на 9 мм и в третий раз - на 8 мм. Мисочку осторожно снимают и используют для испытания.
3.14.3. Проведение испытания
На дно чашки Петри отверстием вверх закрепляют 10 мисочек, на дно каждой мисочки помещают по 50 мг маточного молочка. Чашки Петри ставят на 30 мин в термостат температурой 35 °С и относительной влажностью 96%. Затем в каждый маточник стерильным шпателем вносят однодневные пчелиные личинки и чашки снова помещают в термостат. Через 24 и 48 ч в маточники вносят по 50 мг маточного молочка, а через 72 и 96 ч - по 100 мг, считая время от момента закладки личинок в маточники. На шестой день подсчитывают количество живых личинок и взвешиванием определяют их массу.
3.14.4. Обработка результатов
Живых личинок должно быть не менее семи и средняя масса их - не менее 180 мг.
4. ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ. Молочко маточное пчелиное. Технические условия. ГОСТ 28888-90.
4.1. Сырое маточное молочко хранят в холодильниках при температуре не выше минус 6 °С и не ниже минус 10 °С.
4.2. Сырое маточное молочко перевозят всеми видами транспорта в соответствии с правилами перевозки скоропортящихся грузов, действующими на данном виде транспорта.
5. ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ. Молочко маточное пчелиное. Технические условия. ГОСТ 28888-90.
5.1. Изготовитель гарантирует соответствие сырого маточного молочка требованиям настоящего стандарта при соблюдении условий транспортирования и сроков хранения.
Гарантийный срок хранения сырого маточного молочка при температуре хранения от минус 6 до минус 10 °С - 6 мес и при температуре окружающего воздуха - не более 2 ч.
Купить маточное молочко пчелиное в интернет магазине Апинрин.
Оставить комментарий